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2.1...
黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母SMD1168中的表达
作者： 郭元芳 [1] ; 孙高英 [1] ; 郝建荣 [1] ; 彭炳银 [2] ; 毕文祥 [1] ; 鲍晓明 [2]
摘要：目的：在毕赤酵母SMD1168中用3-磷酸甘油醛脱氢酶基因启动子（glyceraldehyde-3-phosphate dehygrogenase gene promoter，pGAP）表达黑曲霉葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）。方法：将黑曲霉aeee30161的GOD基因插入具有pGAP的pGAPZotA质粒中，构建黑曲霉GOD毕赤酵母表达载体，并用菌落PCR、重组质粒琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切分析及测序等方法对其进行验证。然后用重组质粒电转化毕赤酵母SMD1168，并用PCR扩增分析观察转化效果，用SDS—PAGE及酶活检测观察重组酵母黑曲霉GOD的表达和活性。结果：用黑曲霉aeee30161的GOD基因成功构建了GOD表达载体pGAPZctA—GOD。转化后，pGAPZotA—GOD相关DNA片段已整合进重组毕赤酵母SMD1168-GOD基因组中。SMD1168-GOD可高表达具有活性的GOD，在30℃、pH6的条件下，其培养液上清GOD酶活可达107．18u／mL。结论：重组蛋白缺陷性毕赤酵母SMD1168-GOD可以利用；pGAP高效表达黑曲霉GOD。
关键字： 葡萄糖氧化酶 黑曲霉 毕赤酵母 基因表达 启动子