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2.1...
梅毒包膜脂蛋白基因的克隆、表达及临床抗体的检测
作者： 田慧群 ; 冯晶 ; 邓鑫松 ; 覃玉娥 ; 刘朝奇
摘要：目的：克隆tp15、tp17、tp47、tp0453基因，构建原核表达质粒，进行蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体。方法：PCR扩增4个基因，构建原核表达质粒pET28a（＋）／tp15、pET28a（＋）／tp17、pGEX-6P-1／tp47和pGEX-6P-1／tp0453，经双酶切及测序鉴定，将获得的阳性克隆转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，对表达产物进行SDS—PAGE电泳及West—ernblot分析鉴定，利用亲和层析方法对4个蛋白进行纯化。将四个纯化的蛋白固定到NC膜上，利用immuno—slotblot方法对梅毒病人血清进行检测。结果：经鉴定表明成功构建四个原核表达质粒。SDS—PAGE电泳及Westernblot分析结果显示四个重组蛋白大小正确。immuno—slotblot实验显示四个蛋白能与梅毒病人血清特异性结合。结论：成功克隆、表达和纯化了tp15、tp17、tp47、tp0453蛋白，四个蛋白可以与梅毒病人血清特异性结合，为进一步建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定基础。
关键字： 梅毒螺旋体 tp15 tp17 tp47 tp0453 immuno—slot blot