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2.1...
人GLP-1-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达
作者： 王圣钧 [1] ; 郁慧丽 [1] ; 翟琳 [1] ; 王倩 [2] ; 梁泉峰 [1] ; 祁庆生 [1,2]
摘要：目的：构建GLP-1-IgG Fc融合蛋白分子并在毕赤酵母中实现高效表达。方法：使用蛋白质工程技术改造GLP-1,去除其蛋白酶降解位点,然后利用重叠延伸PCR方法得到改造后的GLP-1与人IgG-Fc片断的嵌合体基因并将其插入pPIC9K载体中。以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行表达。采用SDS-PAGE和Western Blot方法检测重组蛋白的表达。结果：成功的构建了GLP-1-IgG Fc嵌合体基因并使其在重组毕赤酵母中高效分泌表达。在25℃条件下,摇瓶培养添加0.5%甲醇诱导72h后融合蛋白的表达量最大,为5mg/L。SDS-PAGE和Western-Blot结果表明表达产物为GLP-1-IgG Fc融合蛋白。结论：获得了高效表达GLP-1-IgG Fc融合蛋白的毕赤酵母菌株,为GLP-1-IgG Fc的活性和半衰期测定及下一步的开发奠定了基础,并为在毕赤酵母菌中表达其他Fc融合蛋白和抗体提供了参考。
关键字： 胰高血糖素样肽-1 Fc融合蛋白 巴斯德毕赤酵母菌 高效表达
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