水稻YTB中OSVDAC5蛋白的原核表达与抗体制备

作者： 秦圣光 ; 程钢 ; 刘学群 ; 郭锐进 ; 周杰 ; 王春台

摘要：目的：克隆水稻YTB osvdac5基因,原核表达后获得纯化的OSVDAC5蛋白,制备相应的抗体。方法：采用Trizol法提取水稻总mRNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增得到该基因与原核表达载体连接,构建重组质粒pET-30a-osvdac5,并转入大肠杆菌进行原核表达,SDS-PAGE检测表达产物。通过镍柱纯化获得的单一目的蛋白用于抗体制备,用Western Blot检测抗体的特异性。结果：克隆到原核表达载体中osvdac5基因的ORF为813 bp,编码271个氨基酸。在大肠杆菌中15℃、0.7mmol/L的IPTG浓度诱导17 h是pET-30a-osvdac5融合蛋白表达的优选条件,表达的OSVDAC5蛋白属于包涵体蛋白。镍柱纯化后的OSVDAC5为30 kD左右的单一条带。Western Blot分析表明,抗体能够与30 kD处的OSVDAC5蛋白进行特异性结合。结论：成功克隆了水稻YTB osvdac5基因,原核表达蛋白OSVDAC5制备的多克隆抗体具有一定特异性,能与免疫抗原结合,这为进一步研究OSVDAC5蛋白在植物不同生长发育时期中的表达模式奠定了基础。

关键字： 水稻    VDAC    克隆    原核表达    抗体      

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