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棘孢木霉木聚糖酶Ⅰ基因和启动子克隆与分析
作者： 庞漫宇 [1] ; 郭丽琼 [1,2] ; 项凡 [1] ; 林俊芳 [1,2]
摘要：目的：克隆及分析棘孢木霉木聚糖酶Ⅰ结构基因和上游调控区,以获得内源启动子。方法：根据木霉属木聚糖酶Ⅰ结构基因及上游调控区的保守性,以棘孢木霉基因组DNA为模板,进行简并PCR扩增。产物纯化并克隆至T载体,经酶切鉴定后进行序列分析。结果：扩增获得1.2 kb的片段,酶切鉴定及序列分析表明,该片段长1 265 bp,由753 bp的木聚糖酶Ⅰ结构基因和512 bp的上游调控区组成。结构基因编码230个氨基酸,具有糖基水解酶第11家族的典型保守区域。上游调控区具备核心启动子和转录起始点,有CAAT-Box、TATA-Box等启动子特征元件,分析其还有CreⅠ、XlnR、Ace1、AreA等多个转录因子结合位点。结论：克隆的512 bp上游调控区是典型的丝状真菌基因启动子,可作为内源启动子用于构建棘孢木霉高效外源基因表达系统。
关键字： 棘孢木霉 木聚糖酶Ⅰ 基因克隆 启动子
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