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根癌土壤农杆菌Ti质粒VirE2基因的克隆及原核表达
作者： 刘红玲 [1] ; 李小红 [2] ; 王彦芹 [2] ; 王爱英 [2] ; 祝建波 [2]
摘要：目的：获得根癌土壤农杆菌Ti质粒VirE2基因原核表达蛋白,为研究其功能打下基础。方法：利用PCR方法,根据发表的根癌土壤农杆菌（Agribacterium tumefaciens）C58Ti质粒基因序列,设计1对引物扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区蛋白VirE2基因,连接T载体经测序,结果与发表的序列同源性达100%。将目的片段从T载体上切下,连接至原核表达载体PET-30a上,转化E.coli DH5α,筛选出阳性克隆,提质粒转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达。结果：经SDS-PAGE电泳,发现与对照比较在略小于66kDa处有特异条带,与理论大小（63.5kDa）相符。结论：克隆的VirE2基因获得了原核表达。
关键字： VirE2基因 克隆 表达