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2.1...
Exendin-4在大肠杆菌中的串联表达、纯化及活性鉴定
作者： 刘延杰 ; 林鲁霞 ; 宋长征 ; 季虹 ; 荣海钦
摘要：目的：完成钝尾毒蜥Exendin-4基因在大肠杆菌中的串联高效表达。方法：按照大肠杆菌偏爱密码子设计Exendin-4基因片段,利用同尾酶构建多拷贝串联的表达载体,于大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,SDS-PAGE鉴定结果,表达产物Ni柱纯化后肠激酶切割,高效液相色谱及四级杆-飞行时间质谱纯化、鉴定,确定目标产物,作用胰岛瘤细胞INS-1检测胰岛素释放活性。结果：成功构建重组载体pET28a-（Exendin-4）n（n=2,4,6）,且均获得可溶性表达产物,重组表达蛋白经切割、纯化、鉴定和制备,最终得到纯度98%的Exendin-4,其具有与标准品相似的促葡萄糖刺激的胰岛素释放活性。结论：试验成功利用串联表达方式制备有活性的Exendin-4,为下一步2型糖尿病治疗药物的研究奠定了基础。
关键字： Exendin-4 串联表达 纯化 胰岛素释放试验 2型糖尿病