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根癌农杆菌介导里氏木霉转化体系的建立和条件优化
作者： 刘刚 ; 杨长得 ; 康康 ; 邢苗 ; 田生礼
摘要：目的：采用根癌农杆菌介导的转化方法实现丝状真菌里氏木霉的遗传转化,并优化转化条件。方法：构建含潮霉素抗性基因（hph）的双元载体pCAM-hph后,转化根癌农杆菌LBA4404获得转化菌株。将根癌农杆菌的转化菌株和里氏木霉的分生孢子共培养后在含100μg/mL潮霉素的抗性平板上筛选里氏木霉转化子,并采用PCR扩增和序列测定对转化子中的插入片段进行了分析。结果：使用根癌农杆菌介导的转化方法转化里氏木霉,每106个分生孢子可获得25.8个转化子。最佳的转化条件为：农杆菌初始浓度为OD660约为0.8,孢子数为106个,共培养时间为48h,pH为5.0～5.5,培养温度为28℃。结论：建立了根癌农杆菌介导的里氏木霉转化方法,并获得了最佳的转化条件。
关键字： 里氏木霉 根癌农杆菌 分生孢子 潮霉素磷酸转移酶 双元载体
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