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一种快速筛选有效RNAi片段的方法

作者: 邢雪琨 [1,2] ; 徐存拴 [2,3] ; 张富春 [1] ; 马纪 [1]

摘要:目的:介绍一种快速筛选有效RNAi片段的方法。方法:构建CC趋化因子配体2(chemokine(C-C motif)ligand 2,CCL2)的表达载体、干涉载体和检验载体;计算检验载体的绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞率;Real-time PCR检测干涉载体的干涉效果;计算PH72h和168h转基因大鼠的肝再生率。结果:检验载体及其对照在24h表达GFP的细胞数最多,其中检验载体CCL2-CCL2(255)在各时间点的表达量均最低;Real-time PCR结果显示干涉载体CCL2(255)干涉效果较好;表达载体CCL2-N1能提高转基因大鼠PH168h的肝再生率,达105%,而干涉载体CCL2(255)仅78%,与对照均有显著差异。结论:将靶基因和干涉片段构建到同一个载体上,通过观察、计算GFP的表达量可快速筛选有效RNAi片段,此法高效经济、省时省力。


关键字: CC趋化因子配体2    干涉载体    检验载体    肝再生率      


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