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高密度发酵P.pastoris诱导表达葡聚糖外切酶
作者： 杨穗珊 [1,2] ; 易国辉 [1] ; 屠发志 [1] ; 张添元 [3] ; 罗进贸 [3] ; 张爱联 [1]
摘要：目的：应用P.pastoris的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法：PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反应器中进行。连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后用甲醇诱导表达64h。结果：放罐时生物量为A600=180,重组CBHⅡ产量为80mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。结论：实现应用pAOX1表达系统在生物反应器中高密度发酵P.pastoris诱导表达CBHⅡ。该研究为重组CBHⅡ的规模化生产打下基础。
关键字： 葡聚糖外切酶 P pastoris 高密度发酵