重组人ERP57蛋白克隆和原核表达
作者: 杨建林 ; 韩钰 ; 王艳林 ; 张伟
摘要:目的:克隆人ERP57蛋白进行原核表达和纯化。方法:采用巢式RT-PCR从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人ERP57 cDNA,构建ERP57原核表达质粒(pET-28a/ERP57)并转化E.coli的BL21菌株。IPTG诱导蛋白表达,并在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化。分别用SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:成功获得大小为1518bp的人ERP57基因片段,转化菌诱导性表达61kDa的人ERP57蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化。结论:成功获得纯化的重组人ERP57蛋白,为后续ERP57蛋白功能研究奠定了基础。
关键字: ERP57 基因克隆 人重组蛋白 原核表达 蛋白纯化
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